Определение строения белков

Научная литература / Химия. Белки / Определение строения белков
Страница 1

Определение строения белков является очень сложной задачей, но за последние годы в химии белка достигнуты значительные успехи. Помимо методов получения высокомоле­кулярных синтетических полипептидов, построенных из большого чис­ла молекул одинаковых а-аминокислот, разработаны методы синтеза смешанных полипептидов с заранее заданным порядком чередования различных а-аминокислот путем постепенного их наращивания.

Полностью определена химическая структура нескольких белков: гормона инсулина, антибиотика грамицидин, фермента, расщепляющего нуклеи­новые кислоты, рибонуклеазы, гормона аденокортикотропина, белка вируса табачной мозаики, миоглобина, гемоглобина и др. Частично определена структура некото­рых других белков.

Изучение химического строения белка начинают с определения аминокислотного состава. Для этого используется главным образом метод гидролиза, т. е. нагревание белка с 6—10 моль/л соляной кислотой при температуре 100—110°С. Получают смесь а-аминокислот, из которой можно выделить индивидуальные аминокислоты.

Например, полный гидролиз одного трипептида приводит к образованию трех аминокислот:

Для количественного анализа этой смеси в настоя­щее время применяют ионообменную и бумажную хроматографию. Сконструированы специальные автоматические анализаторы ами­нокислот.

Итак, гидролиз белков, по существу, сводится к гидролизу полипептидных связей. К этому же сводится и процесс переваривание.

Разработаны также ферментативные методы ступенчатого рас­щепления белка. Некоторые ферменты расщепляют макромолекулу белка специфически — только в местах нахождения определенной аминокислоты. Так получают продукты ступенчатого расщепления — пептоны и пептиды, последующим анализом которых устанавлива­ют их аминокислотный состав.

Значительно более сложным является определение последова­тельности амидокислот в пептидных цепях белка. С этой целью пре­жде всего определяют N- и С-концы полипептидных цепей, при этом решаются два вопроса—идентифицируются концевые аминокислоты и определяется число пептидных цепей, входящих в состав макромо­лекул белка. Для определения N-концов пептидной цепи получают N-производное концевой аминокислоты пептида, которое идентифицируют после полного гидролиза пептида. С-концы пептидных цепей определяются избирательным отщеп­лением концевой аминокислоты с помощью специфического фермен­та — карбоксипептидазы и последующей идентификацией этой амино­кислоты. Если макромолекула белка состоит из двух (или более) пеп­тидных цепей, как в случае инсулина, то избирательно разрушают дисульфидные мостики окислением (например, над-муравьиной кислотой) и затем полученные полипептиды разделяют путем фракционирования на ионитах. Для определения последова­тельности расположения аминокислот в каждой полипептидной цепи ее подвергают частичному кислотному гидролизу и избиратель­ному расщеплению с помощью ферментов, каждый из которых раз­рывает полипептидную цепь только в определенных местах присоеди­нения какой-то одной определенной аминокислоты или одного типа аминокислот (основных, ароматических). Таким образом получают несколько наборов пептидов: которые разделяют, используя методы хроматографии и электрофореза. Строение коротких пептидов определяют последовательным от­щеплением и идентификацией концевых аминокислот упомянутыми выше методами, а большие пептиды подвергают дополнительному расщеплению с последующим разделением и определением строе­ния. Затем путем сложного сопоставления структуры различных уча­стков пептидной цепи воссоздают полную картину расположения аминокислот в макромолекуле белка. Работа эта очень трудоемкая, и для определения химической структуры белка требуется несколь­ко лет.

Страницы: 1 2

Смотрите также

Чугун
Чугун сплав Fe с С (обычно 2-4%), содержащий постоянные примеси (Si, Mn, S, P) а иногда легирующие элементы ( Cr, Ni, V, Al ) ; как правило, хрупок. Получают из железорудных материалов в доме ...

Белки, углеводы, жиры и липоиды
...

Химия парфюмерно-косметических изделий
Слово « косметика» происходит от греческого слова kosmetike, что означает « искусство украшать себя», а «парфюмерия»- от французского parfum, те приятный запах, духи. Письменные источник ...