Гель-проникающия хроматография
ГПХ имеет в своей основе единый механизм разделения. В отсутствии спец взаимодействий пробы и неподвижной фазы порядок элюирования во всех случаях является функцией размера молекул. Для синтетических неразветвленных полимеров, существующих в растворе в виде статистического клубка, размеры молекул можно непосредственно связать с молекулярной массой. Это позволяет откалибровать колонку при помощи полистирольных стандартов, элюируя их дихлорметаном, а затем проводить на этой колонке разделение белков или водорастворимых полимеров, элюируя их водой или водными буферными растворами.
Мертвый объем в ГПХ определяется как объем элюирования молекул низкомолекулярного вещества, не взаимодействующего с сорбентаом, но проникающем во все поры, включая поры наименьшего диаметра. Мертвый объем складывается из объема неподвижной фазы и объема пор. Объем неподвижной фазы определяется как удерживаемый объем полностью исключенных молекул с большой средней молекулярной массой не проникающих в поры.
Сорбенты.
Устойчивость к химическим взаимодействиям, температуре и механическим воздействиям.
Широкие возможности варьирования проницаемости.
Однородная структура.
Не должны вступать в адсорбционные взаимодействия.
Сефадексы. Полиакриламидные гели, агарозные гели, полистиролы, силикатные сорбенты.
Растворители.
Должны растворять образец
Смачивать сорбент
недопускать адсорбции полимера на сорбенте.
ТГФ – универсальный растворитель,
Толуол – полиизопрены, силиконы,
ДМФА – полиамиды,
Водные буферные растворы – белки.
Оптимизация условий разделения.
Определить ММР для колонки по стандартному набору полистеролов и выбрать подходящую колонку или несколько колонок. Исключить ионные взаимодействия образца путем введения нейтральных солей в элюент.
Смотрите также
Витамины и их значение для организма
Трудно представить, что
такое широко известное слово как «витамин» вошло в наш лексикон только в начале
XX века. Теперь известно, что в основе жизненно важных процессов обмена веществ
в орг ...
Применение топлив, смазочных материалов и специальных жидкостей
...
Расчет фонда заработной платы работающих .
Расчет
фонда заработной платы предполагает определение годового фонда и средней
заработной платы отдельных категорий и групп работающих. ...