Гель-проникающия хроматография
ГПХ имеет в своей основе единый механизм разделения. В отсутствии спец взаимодействий пробы и неподвижной фазы порядок элюирования во всех случаях является функцией размера молекул. Для синтетических неразветвленных полимеров, существующих в растворе в виде статистического клубка, размеры молекул можно непосредственно связать с молекулярной массой. Это позволяет откалибровать колонку при помощи полистирольных стандартов, элюируя их дихлорметаном, а затем проводить на этой колонке разделение белков или водорастворимых полимеров, элюируя их водой или водными буферными растворами.
Мертвый объем в ГПХ определяется как объем элюирования молекул низкомолекулярного вещества, не взаимодействующего с сорбентаом, но проникающем во все поры, включая поры наименьшего диаметра. Мертвый объем складывается из объема неподвижной фазы и объема пор. Объем неподвижной фазы определяется как удерживаемый объем полностью исключенных молекул с большой средней молекулярной массой не проникающих в поры.
Сорбенты.
Устойчивость к химическим взаимодействиям, температуре и механическим воздействиям.
Широкие возможности варьирования проницаемости.
Однородная структура.
Не должны вступать в адсорбционные взаимодействия.
Сефадексы. Полиакриламидные гели, агарозные гели, полистиролы, силикатные сорбенты.
Растворители.
Должны растворять образец
Смачивать сорбент
недопускать адсорбции полимера на сорбенте.
ТГФ – универсальный растворитель,
Толуол – полиизопрены, силиконы,
ДМФА – полиамиды,
Водные буферные растворы – белки.
Оптимизация условий разделения.
Определить ММР для колонки по стандартному набору полистеролов и выбрать подходящую колонку или несколько колонок. Исключить ионные взаимодействия образца путем введения нейтральных солей в элюент.
Смотрите также
Химия гидразина
Химия гидразина изучается уже почти три четверти века. До 1875 г. были известны только симметричные дизамещенные гидразина— гидразосоединения. В 1875 г. Э. Фишер, исследуя процесс восстановлен ...
Амиды
Амидами называют производные кислот,
в которых гидроксильная группа заменена на аминогруппу. Амиды можно
рассматривать также как ацильные производные аминов. По номенклатуре IUPAC названия
...
Свинцовые аккумуляторы
Кислотные свинцовые
аккумуляторы являются наиболее распространенными
среди вторичных
химических источников тока. Обладая сравнительно высокой
мощностью в сочетании
с надежностью и ...