Гель-проникающия хроматография

Книги по химии / Хроматографические методы / Гель-проникающия хроматография

ГПХ имеет в своей основе единый механизм разделения. В отсутствии спец взаимодействий пробы и неподвижной фазы порядок элюирования во всех случаях является функцией размера молекул. Для синтетических неразветвленных полимеров, существующих в растворе в виде статистического клубка, размеры молекул можно непосредственно связать с молекулярной массой. Это позволяет откалибровать колонку при помощи полистирольных стандартов, элюируя их дихлорметаном, а затем проводить на этой колонке разделение белков или водорастворимых полимеров, элюируя их водой или водными буферными растворами.

Мертвый объем в ГПХ определяется как объем элюирования молекул низкомолекулярного вещества, не взаимодействующего с сорбентаом, но проникающем во все поры, включая поры наименьшего диаметра. Мертвый объем складывается из объема неподвижной фазы и объема пор. Объем неподвижной фазы определяется как удерживаемый объем полностью исключенных молекул с большой средней молекулярной массой не проникающих в поры.

Сорбенты.

Устойчивость к химическим взаимодействиям, температуре и механическим воздействиям.

Широкие возможности варьирования проницаемости.

Однородная структура.

Не должны вступать в адсорбционные взаимодействия.

Сефадексы. Полиакриламидные гели, агарозные гели, полистиролы, силикатные сорбенты.

Растворители.

Должны растворять образец

Смачивать сорбент

недопускать адсорбции полимера на сорбенте.

ТГФ – универсальный растворитель,

Толуол – полиизопрены, силиконы,

ДМФА – полиамиды,

Водные буферные растворы – белки.

Оптимизация условий разделения.

Определить ММР для колонки по стандартному набору полистеролов и выбрать подходящую колонку или несколько колонок. Исключить ионные взаимодействия образца путем введения нейтральных солей в элюент.

Смотрите также

Биоактивные производные хитозана
...

Альтернативная водородная энергетика как элемент школьного раздела химии: "Физико-химические свойства водорода"
Актуальность выбранной темы обусловлена тем, что вопрос о поиске альтернативных видов топлива для защиты окружающей среды от негативных воздействий вызывает интерес. А интерес учащихся к те ...

Адсорбционная хроматография
...